液质联用：

 

质量分析器的类型

了解LC-MS的接口也很重要

1.种类及发展：

1.传送带(moving belt)式的LC-MS: 目前已经停用管理的基本介绍

2.热喷雾(TSP) LC-MS接口:  已经很少使用

3.粒子束(PBI)

4.大气压电离源(API):目前最常用的方法

电喷雾(ESI)、大气压化学电离源(APCI)。

2.各接口应用范围

 

3.大气压电喷雾质谱应用范围

 

两种接口各有何不同？

 

正、负离子化模式的选择?

 

 

流动相的选择

流量和色谱柱的选择

辅助气体流量和温度的选择

 

【这些你知道吗？】

1、由于液质的流速较小（ESI一般为0.2ml/min），所以配置样品的溶剂强度不能太大，尽量小于起始比例，否则，会出现保留时间偏移等问题。
2、如果在液相上摸好的条件，注意尤其是流动相的组成要转化成合适LCMS分析的。
3、磷酸盐及其他不挥发缓冲盐在离子源会沉淀并堵塞毛细管等，要更换成可挥发的有机缓冲盐。
4、缓冲盐会导致离子抑制，因此要控制缓冲液的强度，<10mM。
5、去污剂、表面活性剂会有离子抑制现象发生， 表面活性剂产生的加合物和离子簇会干扰质谱数据，因此作液质联用仪时，不要使用洗涤剂清洗玻璃器皿等容器，如果一定要用，建议超声清洗多次。

来自网友的忠告

1.前处理：样品一定要干净，不管是为了质谱还是为了保护柱子，生物样品提取的好些，如果直接沉淀，一定要注意，尽量高转速12000rpm以上，低温离心，最好离2次（保险一点），转移样品也要仔细，从中间慢慢吸，有时会有漂浮物。

2.样品浓度：质谱是灵敏度很高的仪器，进样浓度一定不能太高，1－2μg/ml已经可以啦，太高的浓度对仪器来说比较容易造成残留，而且定量也会不准啦。

3.流动相:流动相中尽量加易挥发的盐，尽量不要加表面活性剂之类的，容易离子抑制，如果遇到离子抑制，可以试试把你的样品峰往后推推或者改变提取方法，也可以试试用APCI源。如果你的液相是低压混合的，尽量不要跑梯度，那样很费时间，如果没办法，一针又要走很长时间的话，可以考虑切换，只测样品出峰前后的那段时间，这样可以保护质谱。但是如果你用粗柱子，较高流速的也可以考虑跑梯度，如API4000，但要尽量减小死体积。

4.冲洗:冲柱子自然不用说了，低有机相和高有机相分别冲一定时间（各至少半个小时以上吧），柱子保存在高有机相中。做完试验，冲源也是很重要的，也是低有机相和高有机相冲，但是时间可以不用那么长，你可以先冲源再冲柱子，或者两者分开冲，个人觉得分开冲好些，这样柱子上的脏东西就不会进到源里面去啦。冲源的时候气可以关小些。

5.日常维护:注意用流动相HPLC级,水用超纯水,不含磷酸盐等缓冲液，防湿防尘(用除湿机各遮布)，用UPS电源以防临时停电影响，样品分析后用异丙醇液清洗雾化室，此外,定期清洗雾化针和查看泵油液面等。

仪器状态正常时，最基本的维护

一般气源检查，总压力不能过大，检查泵油位置，查看真空度等，勤冲洗管路，特别是测完样品后多冲，离子源多清洗，泵油定期检查、更换，滤网及时更换清洗。

1.定期震气，更换机械泵油、滤网，必要时仪器除尘等。
2.每个项目做完，大约1000个样品后，清洗离子源、样品锥孔、预四级杆等。
3.定期对质谱进行期间核查、校准等。

液相部分：
应勤过滤流动相或更换新流动相，一般配制一次水相使用时间不要超过三天；
及时清洗流动相滤头；
若发现排空压力增大应及时更换泵头滤芯；
每天做完样应及时冲洗管路及色谱柱。

质谱部分：
勤洗离子源，并定期进行一次彻底的清洗维护，不定时检查雾化针的情况并可定期用异丙醇（或异丙醇：水）悬空超声清洗；
每天进样时检查雾化状况；
每天检查气源情况，防止气源不足造成断气既影响工作又影响仪器使用寿命；
定期检查前级泵泵油情况，及时震气使油回流；
若长时间分析样品，每天或每隔几天应重启电脑及与质谱的通讯设备，防止因通讯故障造成质谱采样出错或无法连接。

【一些注意事项】
1.样品必须过0.22um滤膜过滤，不得有颗粒物；每次进完样后，液相和质谱部分都要冲洗干净。
2.上样的溶剂，必须是色谱纯，最好和你的流动相比例一致。
3.反相体系，不允许用正己烷之类极性弱的溶剂溶解样品并上样；淋洗液缓冲溶剂必须用可挥发的，如乙酸、乙酸铵、氢氧化四丁基铵等，色谱纯级别。
4.如果遇到放长假，实验室没有人，最保险的办法就是关机，以免遇到停电的情况。
5.质谱所处的工作环境最好要无尘，温、湿度要严格控制。
6.样品浓度不能太高，以免污染离子源和四级杆。
7.做实验时，经常关注真空、柱压、碰撞气压力等，如遇情况可以及时处理。
8.六通阀处变三通，最好把没有信号的区域，切换到废液，这样减少源的污染

9.其次电压不要加到极限，尤其是正负离子转换时要适当调整；

10.最后是做完样一定要及时冲洗和吹扫管路。

气质联用与液质联用的区别是什么？

 

应用领域：

 菜鸟问答

首次使用液质，如下问题有疑问：

1、准备使用液质联用测量酿酒酵母胞内代谢物含量，现有的是C18柱子，请问，要测定氨基酸及一些小分子多肽还有有机酸，是否需要柱前衍生化，如果需要使用，那是用PITC，还是OPA或者其他的衍生剂？考虑价格毒性、定量准确性。

2、液质联用流动相一般用甲醇，乙腈就行吗？还需要在液相上实验分离条件吗？在另外的液相上，使用另外的C18，获得的实验流动相条件，可以用于液质吗？

3、最后物质的定量是由质谱图确定的吗？是不是每一种物质的绝对定量都需要加入标准品？

4、可否简要说明一下首次使用液质联用的步骤？比如先确定流动相组成，用各种标品混合物全扫描一次。

热心网友支招：

1 不用，但有可能要挑选C18柱子。

2 液质连用常用溶剂是甲醇，乙腈，水，其他溶剂的使用请参考柱子说明。尽量在LC系统完成分离，可用MS作为检测器(MS的作用相当于UV),做LCMS寻找合适的LC 分离条件。如果流速合适，LC系统允许，使用相同的C18柱子，LC条件可以直接用，但是进质谱需要分流或者调谐质谱达到最佳效果。

3 物质定量是由total ion chromatography的峰（使用peak area ratio)确定，需要加入internal standard（至少一种)

4 液质一般来说：

a) 先直接单一样品(标样)进样，做MS full scan 确定母离子，做MS/MS 确定母离子/子离子对。

b) 每个标样做LCMS （SIM 或full scan 模式), 确定可以尽量在column上就可以分离所有的感兴趣的化合物。

c) 混合或单一标样进样做LCMS （MRM模式，最终定量使用模式），调谐质谱，找到适合所有标样的质谱参数。

d) 混合样加内标做LCMS, 确定内标的浓度。

e) 单一标样或混合加内标进样做LCMS (MRM 模式)，找各标样的线性浓度范围。

f) 加一系列已知浓度的某一(或多个)标样（含内标）历经整个实验过程做标准样品曲线。

g) 背景样品（不加酿酒酵母胞内代谢物），实际样品 （加酿酒酵母胞内代谢物），标准曲线样品（加酿酒酵母胞内代谢物）同步制备，检测。