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干货 | 拖尾峰的原因及处理方法！

张明 0 2023-11-10

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拖尾峰又叫后延峰，拖尾峰表现为前沿陡峭，后沿较前沿平缓的不对称峰。

拖尾峰

拖尾峰原因及解决方法

柱内填料污染

原因：流动相和样品中的杂质易造成色谱柱内填料污染，导致拖尾峰出现。
解决方法：

1.流动相所用的各种溶剂至少是分析纯，尽量使用色谱纯试剂。

2.流动相所用的水最好是超纯水或全玻璃器皿双蒸水。用前先用0.45um溶剂微孔过滤（器）过滤，除去可能存在的微粒。

3.流动相建议现用现配，对于含盐的溶液尤其注意长置会产生细菌或出现沉淀。此外还得保证储存流动相的容器清洁。

4.复杂样品可选用0.45um溶剂微孔过滤（器）或样品预处理柱对样品进行预处理，确保样品中不含微粒杂质。若样品不便处理，要使用保护柱。

色谱柱被堵塞

原因：色谱柱的进出口的筛板堵塞，样品进入色谱柱时会受阻，液体流动受阻形成延迟，使得样品在相中停留时间变长，从而使峰型拖尾。
解决方法：
1.配置流动相时污染流动相使用色谱纯溶液，现配现用，并通过4.5um滤膜过滤后方可使用。
2.型号规格插口不匹配，在扭紧的时候造成形变而促使管道阻塞。色谱柱有物理损坏是会造成峰形拖尾。唯一的解决方法就是更换新柱。
3.样品存在杂质，导致堵塞在筛板处，过滤样品
4.应用较高浓的缓存盐溶液，在关机时将会在出入口端结晶体成块并导致阻塞。

5.适当降低温度，让试剂溶解得慢一些。

6.如以上方法都不能解决堵塞问题，则需考虑换一根新的手性色谱柱。

样品浓度过高致使柱超载

原因：样品在柱上超载能引起峰展宽，拖尾（或伸舌）。
解决方法：适当减小进样量或样品浓度（需要时，可提高检测器灵敏度）直至峰形和保留时间不再改变，便可消除这种不良影响。减小进样量还能改善其分离度。正常情况下，样品中每种化合物在150×4.6mm柱中进样量保持在3～50ug范围内，不会引起明显超载。

柱外效应

原因：柱外效应（即进样阀、色谱柱及检测器间的管路过长、直径过粗、管路接头不匹配、有死体积）是指色谱柱之外的造成色谱峰展宽的成因。
解决方法：在可能的条件下，色谱柱要使用合理管长的管路，连接管内径尽可能窄小，切口务必平整光滑，同时流速需要合理不要过快，可采用色谱柱推荐的流速，以防止因样品扩散造成不能反映色谱柱真实柱效等情况发生。

硅醇基团作用

原因：仔细分析色谱柱内填料表面性质可知：反相色谱柱填料的表面大约被键合相覆盖了一半，其余的就是未被键合的硅醇基团。所谓的保留是指样品分子与键合相相互作用的结果。但是，酸性或碱性化合物与硅胶表面残存的硅醇基团或金属杂质之间相互作用而引起双重保留机理，因此，发生了峰形拖尾。
解决方法：为了减小峰形拖尾，通常可在流动相加入25mM三乙胺（抑制剂）。三乙胺能与硅醇基团发生强烈的相互作用，从而降低或阻断样品分子与硅醇基团的作用，以保证保留机理正常进行，并大大缓解了峰形拖尾。建议使用长链的硅醇基抑制剂，虽起效较慢，但持续力较三乙胺长。因为抑制剂分子中除了胺基与硅醇基团发生极性作用外，大分子中非极性部分与固定相也会发生反相作用而产生保留现象。如果将抑制剂加至样品中，效果会显著。

柱内金属污染

原因：柱内金属污染（Fe，Ni等）可引起峰形拖尾。金属可由填料本身带进，也可由腐蚀性流动相缓慢溶解柱进口的金属滤片，随流动相沉积到柱填料中。
解决方法：若色谱柱内填料被金属污染后，造成酸/碱性样品拖尾，可用碱洗/酸洗后再键合的填料。

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内容来源：分析与GMP

责任编辑：展源

审　　核：何发

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