HPLC分析方法验证中线性中截距问题探讨

展源 0 2023-02-08

分享到

关于分析方法验证线性考察是定量分析的基础和必要条件，定量是基于呈一元一次方程的线性关系进行的，除了需要考察相关系数以确定是否成线性，还必须考察回归方程的截距问题。

通常使用两种方法，一种为Y轴截距绝对值与标准（100%）之比法，另一种为剩余标准差标准（100%）之比法，二种方法均能反应截距的大小，对于含量应该不大于2%，对于有关物质和残留溶剂应该不大于25%（建议不大于15%更科学）。

有人对于截距的要求不是很理解，认为只要测量线性的几个点之间相关系数达到要求及成线性了，那在这范围内的检测都应该是准确的，为什么要求截距呢？首先对于主物质的含量，一般是做80%~120%之间的线性，要求截距不大于2%，这是因为含量的回收率标准一般是98%~102%，我们一般检测的时候都用的是单点法，也就是默认线性过原点，截距是0，峰面积与浓度成正比，例如标准品浓度是1mg/ml，峰面积是1000，那峰面积是1000的时候可以得出样品的真实浓度是1.0mg/ml（如图1的测定曲线），但如果真实的线性曲线截距不等于0而是100，标准品浓度是1mg/ml，峰面积是1100，那样品峰面积1100的时候，如果用外标法即单点法计算的时候浓度激素1.1mg/ml了（如图1的真实曲线），但实际上样品的浓度是1.0mg/ml（即用标准曲线法计算所得），误差也就在1%左右，相对应的截距占标准峰面积的1%，因此也就得出截距在2%之内，那误差也就在±2%之间，在含量标准要求范围内，回收率也是合格的，如果截距超过2%，则误差就超过范围了，那在检测样品的时候可能就会出现含量不合格、回收率达不到要求的现象，而实际上含量是合格的。如果截距不符合要求，不说明方法不能定量，只是不能采用常用的一个对照浓度进行测定，需要采用多个浓度的标准曲线法进行。同理对于有关物质和残留溶剂，也是同样的道理。

图1

一般情况下，我们都想要含量的线性的截距在2%范围之内，有关物质和残留溶剂的线性的截距在25%范围之内，那为什么有些方法中的截距会超呢？可能原因有两种：首先是系统误差比较大，基质背景比较高或者仪器有污染导致，这时候可以把线性最低点加入线性中，一般可以把定量限这个点加入线性中，正常情况下可以把截距拉小；另一种可能是浓度太高，高浓度的时候峰面积已经有过载的迹象，这时候需要将样品浓度调小一些。

内容来源：药物分析学社

责任编辑：展源

审　　核：何发

HPLC测定甲硝唑葡萄糖注射液中甲硝唑含量分析方法验证

2021-02-26
AAS法分析茶叶中的铅,镉,砷

2020-05-27
HPLC分析方法开发经验分享

2023-06-16
药品的分析方法验证

2020-05-27
HPLC检测器,你了解吗？

2024-03-06
减少HPLC分析中乙腈用量方法

2020-05-27
分析方法的耐用性验证

2020-06-30
基于温度梯度的HPLC分析——温度梯度淋洗的HPLC方法基于温度梯度模型的HPLC分析

2020-05-27
将HPLC变成 “绿色分析”方法

2021-02-26

HPLC分析方法验证中线性中截距问题探讨

相关文章