你的细胞培养是不是总出问题？快来看看这些小技巧吧

赵桂芝 0 2021-11-25

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细胞培养原代培养传代培养

细胞培养作为不可或缺的工具,从20世纪出现至今经历了巨大的变化。从60多年前基础培养基DMEM的诞生到今天细胞培养成为生物医药、组织工程和再生医学主流研究中不可或缺的部分,难以想象,如果没有了细胞培养技术,生命科学研究将会是什么样子。

很多人都绕不开养细胞这个坎,稍不留神,就给我们造成内心阴影面积三室一厅。不是栽在细胞污染上,就是活力不好,怎么避免细胞不明不白的挂掉?我们来看一下......

培养细胞死亡

原因

培养箱内无 CO2

培养箱内温度波动太大

细胞冻存或复苏过程中损伤

培养液渗透压不正确

培养液种有毒代谢产物堆积

对策

检测培养箱内 CO2

检查培养箱内温度

取新的保存细胞种

检测培养液渗透压

(注意:大多数哺乳动物细胞能耐受渗透压为 260~350 mOsm/kg。加入额外试剂如 HEPES 或药物都有可能影响培养液渗透压。)

换入新鲜培养液

细胞培养做为生物学研究最基础的技术之一,可以说是渗透科研界的方方面面。工欲善其事,必先利其器。细胞好不好,就看你懂不懂细胞培养的各种技术了。

原代培养

从原代组织中分离细胞的最常用的方法是酶解法(胰蛋白酶和胶原酶)。

用无菌的解剖刀和剪子将组织剪成3~4mm小片,用平衡液(无钙镁离子)清洗组织碎片后去除上清液,并加入0.25%的胰蛋白酶(Trypsin,100mg组织加入1ml胰蛋白酶)或者胶原酶(Collagenase,50~200单位/ml),孵育4-18h。离心取上清后,用平衡液清洗几次后,用完全培养基悬浮细胞,进行培养。

传代培养

依据细胞生长的特点,传代方法有3种:

1、悬浮生长细胞传代(离心法)

将悬浮细胞离心(1000 rpm, 3 min)去上清,收集沉淀物加新培养基,混匀后进行传代培养。

2、半悬浮生长细胞传代(直接吹打法)

此类细胞(如Hela细胞)部分贴壁,但黏贴不牢,可用直接吹打法使细胞从瓶壁上脱落下来,进行传代。