做好药品中元素杂质分析方法验证只需这四步

实验与分析 0 2020-05-27

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药物中杂质元素分析

USP232/233与ICH Q3D在2018年1月1日开始全面实施了,面对新的标准比标准规定,小析姐为您步步拆解药品中元素杂质分析方法验证的工作流程，常见问题和挑战。

　　对于法规指定的24种元素杂质，在风险评估 (Risk Assessment) 过程中，除了可以通过文献查询、供应商调查等非实验手段来确认的低风险金属元素杂质之外，还可以通过一定数量的筛查试验，来评估其他相关元素杂质的潜在浓度水平。

　　监管机构的行业指南指出，根据具体的试验目的(筛查试验/常规实验)，所有的试验开展之前，都要先进行合理恰当的方法验证。

　　今天就药厂实验室典型的元素杂质分析方法验证流程，以及与常见的HPLC方法验证的区别，分为几部分为大家进行介绍。

　　第一步：确定要验证的元素

　　在所有验证工作开始之前，首先要明确需要测试的元素杂质。针对不同的给药途径，法规规定了对应的必须要评估的元素。其中1类，2A类的7种元素，是对所有产品都适用的。对于其他非强制/未主动添加的元素，药厂可以根据其潜在的风险来决定是否要包括在方法验证中。

　　对于这个问题，并没有统一的答案。筛查所有的24种元素，很可能会带来额外的工作量和成本，但在法规全面执行的初期也不失为一种稳妥的办法。

　　元素杂质分类与每日限量

　　第二步：前处理方法

　　明确了要分析的金属元素之后，就要确认方法验证中最重要的部分-样品前处理。好的方法验证，从前处理开始。

　　与

　　虽然每种方法都有自己的特点和适合的样品类型(见下表)，总体来说直接溶解法在操作的简易性与安全性，结果的稳定性上都具有一定的优势，也是可以最先尝试的步骤。

　　四种前处理方法的特点对比

　　比如对于有些易于直接溶解于有机溶剂(比如异丙醇, 二甲亚砜等等)中的医药中间体来说，由于避免了高温高压的反应过程，很多反应性，挥发性强的金属杂质都能获得不错的回收，可以为后期的方法验证以及最终的QC测试节约大量的工作量。

　　对于不能直接溶解的化合物，还可以选择间接溶解法。其中密闭容器微波消解法是最主流的选择，涉及的方法参数组合也比直接溶解要复杂些。

　　酸的选择

　　一般来说，浓/稀硝酸(14M,7M或者2M)可以作为尝试的起点。作为补充，适量的双氧水也可以提供额外的氧化性，而不会产生干扰测试的离子。当然也有很多硝酸无法消解的样品，比如抗抑郁药物卡马西平，盐酸阿米替林，盐酸丙咪嗪，就会在微波消解的条件下和硝酸反应生成极稳定的产物。这时，您可以尝试使用王水或者反王水的组合。

　　当然，如果选择验证全部24种元素的话，适当比例的盐酸，可以在高温消解的同时，稳定诸如汞(Hg)和铂族元素(PGEs)等元素。对于某些特殊样品，完全溶解可能会需要适量的氢氟酸(需要特殊的硬件)，而传统的湿法消化中采用的高氯酸与硫酸，则很少在密闭消解和ICPMS平台上采用。

　　样品量

　　尽量小，除了原料成本的考虑之外(有些API确实很贵哦)，操作安全是很重要的因素。浓酸氧化消解有机物的过程会瞬间产生大量的热量和气体，尽量选择小样品量对于样品溶解和总体操作安全性会有很大帮助。

　　当然样品量减小，会导致加标量和实际进样浓度成比例的减小。这将对耗材(水/高纯酸)的纯度和仪器背景干扰的控制，提出更高的要求。