【摘要】 目的 建立小茴香及盐小茴香的定性定量分析方法。方法 采用薄层色谱法对小茴香及盐小茴香中茴香醛进行定性鉴别;采用气相色谱法测定其中反式茴香脑的含量。结果 应用所建立的方法对多批样品进行定性与定量分析,结果TLC图谱斑点清晰,小茴香与盐小茴香中反式茴香脑的含量无明显差异。反式茴香脑在 0.15～1.53 g范围内呈良好线性关系,平均回收率为99.17%(n=6)。结论 本方法重复性好、简便易行,结果准确、可靠,可用于小茴香及盐小茴香的质量控制。
【关键词】 小茴香;盐小茴香;薄层色谱法;气相色谱法;反式茴香脑
Study on Qualitative and Quantitative Analysis of Fennel and Prepared Fennel XING Jun-bo, CAO Hong, CHEN Yu-min, et al (Institute for Drug and Instrument Control of Health Dept, GLD of PLA, Beijing 100071, China)
Abstract：Objective To establish a method for qualitative and quantitative analysis of Fennel and prepared Fennel. Method TLC was used for identification of anisealdehyde, and gas chromatography carried out to determine the content of trans-anethole in Fennel and prepared Fennel. Results The calibration curve of trans-anethole was found to be linear in the range of 0.15～1.53 g. The average recovery of trans- anethole was 99.17% (n=6). Conclusion The method was simple, rapid and well reproducible. It can be used as a reliable method for quality control of Fennel and prepared Fennel.
Key words：Fennel;prepared Fennel;TLC;GC;trans-anethole
小茴香为伞形科植物茴香Foeniclum vulgare Mill.的干燥成熟果实,具有散寒止痛、理气和胃之功效[1],其炮制品盐小茴香具有暖肾散寒止痛之功效。作为常用中药,小茴香及盐小茴香广泛应用于临床,但《中华人民共和国药典》2005年版(一部)尚未建立盐小茴香的质控标准,小茴香药材标准仅收载了性状、鉴别、检查和挥发油总量测定等项目,缺乏具体的定量检测指标。小茴香主要含有挥发油、脂肪油等多种成分,具有抗菌、保肝和利尿等作用[2]。为了更有效地控制其质量,本研究建立了盐小茴香挥发油类成分的定性及定量质量控制方法,并对药典中小茴香药材的标准进行了修订和补充。修订后的标准操作性更强,方法重复性好、简便易行,提高了其质量可控性。
1 仪器与试药
Agilent 6890N气相色谱仪,FID检测器;KQ-300E型超声波仪(昆山市超声仪器有限公司)。
反式茴香脑对照品(批号89H2511,A-8639,SIGMA 试剂公司);茴香醛对照品(110838-9903,鉴别用,购自中国药品生物制品检定所)。小茴香(批号Y080807、Y080808、 Y080809)、盐小茴香(批号080807、080808、080809、081118021、080115011)样品由浙江中医药大学饮片厂提供。石油醚、乙酸乙酯、乙醚等均为分析醇,重蒸馏水。
盐小茴香炮制方法：取净小茴香,照盐水炙法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅡD],加盐水(将食盐加适量水溶解后滤过)拌匀,闷透,以文火加热,炒至微黄色,取出,放凉。每100 kg小茴香用食盐2 kg。
2 定性鉴别
取本品粉末2 g,加乙醚20 mL,超声处理10 min,滤过,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯1 mL,作为供试品溶液。另取茴香醛对照品,加乙酸乙酯制成每1 mL含0.4 mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法[2005年版《中华人民共和国药典》(一部)附录ⅥB]试验,吸取供试品溶液与对照品溶液各5 L,分别点于同一硅胶G薄层板上,以石油醚(60～90 ℃)-乙酸乙酯(17∶2.5)为展开剂,展至约8 cm,取出,晾干,喷以二硝基苯肼试液。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。
3 反式茴香脑含量测定
3.1 色谱条件
弹性石英毛细管柱DB-WAX(柱长30 m,内径0.32 mm,膜厚度0.25 m),FID检测器;柱温为145 ℃;进样口温度为200 ℃,检测器温度为250 ℃,H2流速为30 mL/min,空气流速为400 mL/min;分流比为10∶1。
3.2 对照品溶液的制备
取反式茴香脑对照品适量,精密称定,加乙酸乙酯制成每1 mL含400 g的溶液,即得。
3.3 供试品溶液的制备
取本品粉末(过3号筛)约0.5 g,精密称定,精密加入乙酸乙酯25 mL,称定重量,超声处理(功率300 W,频率40 kHz) 30 min,放冷至室温,再称定重量,用乙酸乙酯补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
3.4 专属性试验
照“3.3”项下方法制备供试品溶液,比较供试品溶液、反式茴香脑对照品溶液、溶剂的色谱图,结果在上述色谱条件下,样品中反式茴香脑峰与其他组分色谱峰达到基线分离,溶剂的色谱峰对测定无干扰(见图1)。
A B
C D
注：A.对照品;B.小茴香样品;C.盐小茴香样品;
D.溶剂对照;1.反式茴香脑
图1 小茴香及其盐制品气相色谱图
3.5 线性关系考察
精密称取反式茴香脑对照品适量,加乙酸乙酯溶解并制成浓度为3.825 6 mg/mL的溶液,作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备液0.2、0.4、0.6、1.0、1.5、2.0 mL置于10 mL量瓶中,加内标溶液至刻度,摇匀。分别精密吸取上述对照品储备2 L,注入气相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积。以进样量(g)为横坐标,峰面积为纵坐标,计算回归方程。结果表明,反式茴香脑在0.15～1.53 g范围内线性关系良好,回归方程为：Y=1 610.550X-10.907 5,r=0.999 7(n=6)。
3.6 稳定性试验
精密吸取供试品溶液2 L,每间隔一定时间进样,测定峰面积,结果反式茴香脑的RSD=1.49%(n=7),表明供试品溶液在16 h内测定结果稳定。
3.7 重复性试验
取同一批号(Y080807)的样品6份,按“3.3”项下方法平行制备供试品溶液,测定含量,结果反式茴香脑含量为17.07 mg/g, RSD=0.37%(n=6),表明本法重复性良好。
3.8 加样回收率试验
称取6份已知含量的同一批样品(反式茴香脑含量为17.07 mg/g)约0.25 g,精密称定,分别精密加入对照品溶液适量,按“3.3”项下方法操作,测定含量,计算回收率,结果见表1。 表1 加样回收率试验结果
3.9 样品测定
取本品8批,按“3.3”项下方法制备供试液并测定,计算反式茴香脑的含量,结果见表2。表2 反式茴香脑含量测定结果(n=4)
4 讨论
本研究建立了盐小茴香薄层色谱鉴别方法,并修订了《中华人民共和国药典》2005年版(一部)小茴香药材标准项下的薄层色谱鉴别方法。修订后的方法斑点清晰、重复性好,且操作性更强、毒性更小。国家食品药品监督管理局2005年5月8日发布的《关于颁布儿茶等43种进口药材质量标准的通知》(国食药监注 [2004]144号)收载了测定小茴香挥发油中反式茴香脑气相色谱测定方法,该方法前处理步骤多,操作繁琐。本研究建立的气相色谱法直接测定药材中反式茴香脑含量,不仅操作简便,且能直接反映原药材的质量。
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