天然产物的提取分离

Jo-Ann M. Jablonski, Andrew J. 0 2020-05-27

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本文将重点讨论Prep150 LC系统用于从紫锥菊提取物等天然产物的提取分离有效成分。系统自带ChromScope软件简单直观，可快速实现化合物的分离。本文原理同样适用于带紫外发色团的任意化合物的分离。

紫锥菊提取物中的天然产物的分离提取

菊苣酸为紫锥菊中主要化合物的一种，它是苯丙素和咖啡酸的衍生物3,4。具有医疗用途，包括上呼吸道感染与癌症的治疗等等。于是，分离出足量的目标化合物以便进行其他实验研究很有必要，包括地点、生长条件和样品处理在内的诸多因素，都会影响到菊苣酸的分离提取，通常需要执行多次粗混合物进样。在本研究中，我们将重点讨论能否将Prep150 LC系统用作从紫锥菊提取物中分离菊苣酸的工具。其由ChromScope软件进行控制，可快速实现化合物的分离提取。本文原理同样适用带有紫外发色团的任意化合物的分离。

实验部分

液相色谱条件

制备级LC系统：配有2545二元梯度模块，Prep 150 LC系统，Prep Inject手动进样器模块，2489紫外可见光检测器和沃特世馏分收集器III;分析柱：Atlantis T3，5 µm, 4.6 x 50 mm;制备柱：Atlantis T3 OBD Prep，5 µm, 19 x 50 mm;流动相A：0.1%甲酸的水溶液;流动相B：0.1%甲酸的乙腈溶液。

制备级系统的紫外条件

检测器：2489紫外可见光;波长模式：单一;波长：330 nm;采样速率：5 pt/s;过滤时间常数：正常;数据管理：ChromScope软件。

样品前处理

将总计5.3 g的紫锥菊粉末有机根分别加入两个50 mL的离心管内(各含2.66 g与2.64 g紫锥菊粉末)，使用20 mL 70:30的甲醇/水溶液震荡约3 h进行提取。然后对离心管执行离心操作，取上清液，使用多个13 mm的GHP Acrodisk注射器过滤器进行过滤。浓缩蒸发去除提取物中的甲醇，直至形成黄褐色胶状物。将此胶状物溶于14 mL 95:5的水/乙腈溶液中。

结果与讨论

虽然紫锥菊提取物中含有至少四种咖啡酸衍生物，但菊苣酸仍是其中含量最高的一种化合物，菊苣酸在草药产品中的效用主要源于其免疫增强功能8。在蒸干甲醇前，紫锥菊粗提取

物的分析色谱图表明菊苣酸是其中含量最高的化合物(图1A)。使用快速筛选梯度时，粗提取物中的菊苣酸与相邻谱峰之间能够实现良好的分离。为进一步提高谱峰的分离度，实验重

点对梯度进行了研究9，并在分析柱上进行了载样量研究。如图1B所示，分析柱可接受的载样量为35 µL的粗提取物进样体积。

图1. A：紫锥菊粗提取物中的菊苣酸。B：4.6×50 mm色谱柱的梯度与载样量研究。

图2. 紫锥菊粗提取物中菊苣酸(4)以及一种微量杂质(3)(菊苣酸同分异构体)的制备级分离。

图3. 查看色谱图的同时可方便的查看馏分收集信息。

图4.分离操作后馏分富集溶液的分析。

由于大体积的强溶剂进样会使制备级色谱图失真，因此需要利用旋转蒸发仪将粗提取物中的甲醇蒸干，使粗提取物成为胶状。将残余物溶于14 mL 95:5的水/乙腈溶液中。利用ChromScope软件中集成的Prep Calculator(制备计算器)工具，将流速与进样体积从分析柱几何放大至制备柱，所得制备级色谱图如图2所示。实验所用梯度方法将与色谱图一同显示，位于进样信息选项卡中。此外，用户还可以查看馏分收集信息，无需再搜索试管收集体积(图3)。Prep 150 LC系统上的多次进样所得结果显示出非常出色的重现性，实验中对复溶紫锥菊提取物共进行了6次制备级进样。制备所得富集混合物的馏分分析显示：分离出的产品具有很高的纯度(图4)。

小结

实用可靠的Prep 150 LC系统是合成化学家们的理想选择，他们更需要方便易用的纯化仪器来缩短样品循环时间。ChromScope是一款直观的Prep 150 LC系统控制软件，便于用户学习与使用，缩短了培训所需的时间投入。集成的制备计算器工具无需手动计算制备级梯度，

简化了放大操作并节约了实验时间。色谱中高度可视化、带颜色标记的馏分收集带让用户

能够快速找到分离产物的位置，减少了样品处理与后处理中出现的错误。Prep 150 LC系统使用户能够实现化合物的快速分离与纯化，提高了工作效率。Prep 150 LC系统适用于从天然产物提取物中以及从含有紫外吸收化合物的任意样品混合物中分离化合物。

内容来源：沃特世公司(美国)

责任编辑：展源

审　　核：何发