移液模式验证的可追朔性
移液模式验证的可追朔性
移液精确度是许多实验室工作中最重要的一项工作。但实验员如何证实自己移液结果的可靠性呢?建议经常对移液操作进行监控验证。除了重力检验之外，还可以利用光学技术进行移液精度的验证。
图1.利用MVS(R)多通道验证系统可以高效的、具有可追溯性的完成Viaflo公司研发生产的96吸管移液器的性能核查。
评定移液器移液精度的标准方法就是对移液液体的总重量进行秤量。在多管移液器中，对每个吸管所吸取液体的重量检测可以是多达十次的重力检测。对于有着96根或者384根吸管的液体处理系统来讲，这种重量秤量方式是不经济的、浪费时间的，也是不现实的方法。
相比来讲，光学计量就是一种可行性高的替代解决方案。此法需要用微板工作，快速完成96根或者384根吸管的移液精度鉴定、评估。Integra公司提供了把重力检测和光学检测结合在一起的最佳移液精度检测技术，能够把移液精度鉴定的时间缩短到最少、同时也把移液精度检验、鉴定的质量保持在最高水平。当您的实验室没有相应装备时，也可以利用像Artel这样的MVS多通道验证的商业系统来验证。MVS多通道验证系统是一种易用的、标准化的，可对容积在10nl和350ul之间的移液器的移液精度进行验证的系统。反馈的是IS单位制有追述性的检测结果。为了更加清楚明了地说明它的验证情况，以Viaflo 96管移液器为例，使用Artel的MVS多通道验证系统进行移液准确性和精度数据的检验。
填补了移液器和机器人之间的空白
Viaflo 96管移液器(见图1)是一种手动操作的、有着96根吸液管的移液器。操作简单，经济实惠，且高效，它填补了传统移液器和机器人系统之间的空白。这一移液器的控制是手动的，但移液器的运行则是由电驱动的，这也就减轻了操作者的工作强度，能够准确把吸液管插入到微板孔中。Viaflo 96移液器的移液头是可换的。这样就可以保证移液器的移液量与使用要求保持一致;得到最佳的移液结果。96根吸液管的系统可以完成从样本存储容器中吸取样本、运输到微板，从微板到微板的运输或者在一个微板内完成移液的运输等任务。它可以存储十种预先设定的移液模式，也具有存储单独编制的控制程序的能力;以满足多种不同应用的要求。
表1.移液器系统的技术参数
仪器 |
Viaflo 96 |
Viaflo 384* |
吸管数量 |
96 |
96，384 |
移液技术 |
升降式移液技术 |
|
微板兼容性 |
96孔微板和384孔微板，平板/凹板 |
|
外形尺寸 |
42cm x 30cm x 54cm |
|
Viaflo公司的384移液器是Viaflo 96型的扩展型版本;即可使用96吸管移液头也可以使用384吸管的移液头。
为什么进行试验?
利用Artel公司提供的96管移液器MVS多通道验证系统可以完成各种容量(见表2)的移液器的精度鉴定。整个MVS多通道验证系统由标准化的有色溶液、准确的专用微板、专用读取仪以及一套分析软件组成。
表2.移液头一览表
容量范围和不同移液头的吸管数量
订货号 |
6101 |
6131 |
6102 |
6132 |
6103 |
6104 |
容积范围[µl] |
0.5~12.5 |
0.5~12.5 |
5~125 |
5~125 |
10~300 |
50~1250 |
吸管数量 |
96 |
384 |
96 |
384 |
96 |
96 |
除了1250µl的移液头之外，其余移液头的MVS验证时的鉴定测试容量最小为8%;也就是额定容量的8%~100%。
测试的准备工作之一就是让移液头在室温的检测环境下适应一段时间，并通过预湿使吸液管中的空气湿润，即五次吸入标准量的水。然后去掉这些吸管，安装上预湿了的新吸管，并在检测前用试验样本重复(两次)这一过程。所有的移液过程都是按照标准的移液模式(简单移液)来进行的;也就是湿式移液。首先是把稀释溶液分布到微板中;然后在微板中添加规定容积的MVS验证试剂(见表3)。
表3.Viaflo移液头检测到的移液性能和生产厂家规定的技术参数
订货号 |
目标容积 [µl] |
MVS有色溶液 |
测得数据准确性 |
测得数据精确度 |
Integr公司给出的技术参数 |
||
数据准确性(±%) |
精确度(CV,≤%) |
||||||
6101 |
1 |
D |
-5,3 |
1,8 |
20,0 |
12,0 |
|
12.5 |
B |
+0,2 |
0,8 |
2,0 |
1,5 |
||
6102 |
10 |
C |
+3,0 |
0,9 |
5,0 |
2,5 |
|
125 |
A |
-1,2 |
0,4 |
2,0 |
1,5 |
||
6103 |
25 |
B |
+1,5 |
1,0 |
4,0 |
3,0 |
|
300 |
HV |
-0,1 |
0,3 |
2,0 |
1,5 |
||
6104 |
100 |
A |
-0,3 |
0,3 |
5,0 |
2,5 |
|
1250µl和12.5µll移液头的移液速度分为六级;300µll的和125 µl的分八个等级。在完成稀释剂和样板液体的分发之后，微板开始在摇匀器上进行为时两min的摇匀混合。每一份溶剂都要均匀的分布到三块微板上。在读取仪上进行检测之前，每一块微板都要仔细的再检验是否有微小的气泡。
检测的结果和结论
对每一块检测微板的检测(n=3)是按吸管一个个进行的。最后计算一下整个系统偏差(准确度)和96个吸管的变量系数(%CV)。
表3把测试的结果都汇总在一起并与Integra公司规定的移液头特性参数进行了比较。
Artel多通道移液器验证系统测定的数据确认了Integra公司的Viaflo移液头的精度，证明了它在实验室的实际应用中有着很好的移液性能。同时也证明：生产厂家给出的移液头技术数据非常保守，在实践应用中可以做到更好;尤其是在吸取容量小于2µl时。
表格中的数据表明了在各个容积范围内的移液头性能数据。生产厂家给出的数据包含了在不同应用环境条件下使用移液系统时保障安全可靠性的允许偏差值。温度、空气压力、空气湿度等影响因素都对移液器的性能有一定的影响。因此移液器生产厂家制定了适合于所有移液头的最大允许偏差值。
移液的影响因素
外部条件的影响，例如空气压力、移液器温度都会对移液过程产生非常重要的影响。实验员可以采取一些措施来避免这些影响。为了补偿其他压力下的容积偏差实验员可以利用如移液器的内部机制使移液过程与外部环境条件保持一致。为了能够在不同的温度条件下进行移液，建议使用最小的、但能够获得最大移液容积的气垫。
Integra生物技术股份公司&美国Artel有限公司
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