研究大观霉素的质量控制方法

大观霉素的质量控制方法研究

0 2020-05-27

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大观霉素系统适用性试验溶液的HPLC-ELSD图谱，1=氯化氢，2=放线菌胺，3=大观霉素，4=（4S）-二氢大观霉素，5=（4R）-二氢大观霉素。本文采用高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法建立了测定大观霉素及其有关物质（二氢大观霉素、放线菌胺等）的质量控制方法。此方法具有专属性强、灵敏度高、快速简便的特点。

图1. 大观霉素系统适用性试验溶液的HPLC-ELSD图谱，1=氯化氢，2=放线菌胺，3=大观霉素，4=（4S）-二氢大观霉素，5=（4R）-二氢大观霉素。

本文采用高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法建立了测定大观霉素及其有关物质（二氢大观霉素、放线菌胺等）的质量控制方法。此方法具有专属性强、灵敏度高、快速简便的特点。

大观霉素属氨基糖苷类抗生素，与同类抗生素类似，具有极性强、无发色团、紫外检测难的特点。并且结构中半缩酮不稳定，容易降解，从而使大观霉素的含量分析较为困难。以下实验建立了测定大观霉素及其有关物质（二氢大观霉素、放线菌胺等）的质量控制方法。

实验部分

仪器与主要试剂

UM-3000蒸发光散射检测器（通微(上海)分析技术有限公司）；TSK gel ODS-100V（150 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱（日本东曹公司）；大观霉素标准品（中国药品生物制品检定所）；盐酸大观霉素样品曲必星（普强苏州制药有限公司）；甲醇（默克公司）；奥加诺纯水机（奥加诺公司）。其他试剂为分析纯。

色谱条件

色谱柱：TSK gel ODS-100V（150mm×4.6 mm，5μm）柱；柱温：室温；流动相：25 mmol/L 乙酸铵水溶液（含0.1%三氟醋酸（TFA）-甲醇体积比为88：12），等度洗脱，流速：0.6 ml/min；蒸发光散射检测器参数：漂移管温度50℃，载气流速：2.5L/min。

样品制备

称取53mg大观霉素标准品，溶于2ml无水甲醇中，冰水浴下，缓慢加入11.3mg硼氢化钠，放置5h后加盐酸调pH至3.0，最后用纯净水稀释至100ml（该溶液含有放线菌胺、二氢大观霉素等有关物质及少量未反应完的大观霉素。）

称取约1.18mg曲必星样品，溶于2ml纯净水，备用。

结果

由于大观霉素分子中含有三个羟基和两个仲胺基，具有较强的极性。色谱柱的选择方面采用TSKgel ODS-100V色谱柱，这是由于TSKgel ODS-100V 色谱柱采用极性封端技术，可以使用100%纯水做流动相，较普通ODS柱更适合于分析极性物质。

在流动相的选择方面，对包括乙酸铵的浓度，三氟醋酸的加入量，及甲醇的百分比等条件进行了优化。结果表明当水相TFA的含量为0.1%、乙酸铵的浓度25mmol/L、甲醇含量12%的条件下大观霉素及相关杂质可以得到较好分离。在此优化的条件下，对系统适用性实验溶液样品和标准样品溶液进行分析，HPLC-ELSD色谱图分别见图1和图2。

图2. 曲必星的HPLC-ELSD图谱，1=氯化氢，2=大观霉素。