酱油中山梨酸、苯甲酸的测定

0 2020-05-27

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山梨酸苯甲酸

酱油中山梨酸、苯甲酸的测定

　　一、目的与要求：

　　1、掌握酱油、水果汁、果酱中山梨酸、苯甲酸的测定原理及方法。

　　二、原理：

　　样品酸化后，用乙醚提取山梨酸，苯甲酸。将样品提取液浓缩，点于浆酰胺薄层板上，展开,显色后，根据薄层板上山梨酸，苯甲酸的比移值与标准比较定性，并可进行概略定量。

　　三、试剂与仪器：

　　1、异丙醇

　　2、正丁醇

　　3、石油醚沸程：30-60℃。

　　4、乙醚：不含过氧化物

　　5、氨水

　　6、6N盐酸：取100毫升盐酸

　　7、无水乙醇。

　　8、聚酰胺粉：200目。

　　9、山梨酸标准溶液：精密称取0.2000克山梨酸，用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于200毫克山梨酸。

　　10、苯甲酸标准溶液：精密称取0.2000克苯甲酸，用少量乙醇溶解后移入100毫升容量瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于2毫克苯甲酸。

　　11、展开剂

　　(1)正丁醇-氨K--无水乙醇(7：1：2)

　　(2)异丙醇-氨水-无水乙醇(7：1：2)

　　12、显色剂：O.04%溴甲酚紫的50%乙醇溶液，用0.1N氢氧化钠溶液

　　调至PH=8。

　　13、4%氯化钠酸性溶液：于4%的氯化钠溶液中加少量6N盐酸酸化。

　　14、吹风机。

　　15、层析缸。

　　16、玻璃板：10 X 18cm

　　17、微量注射器：10微升，100微升。

　　18、喷雾器。

　　四、操作方法

　　1、样品提取

　　称取2.5克事先混合均匀的样品，置于25毫升带塞量筒中，加0.5毫升6N盐酸酸化，用15、10毫升乙醚提取两次，每次振摇1分钟，将上层醚提取液吸人另一个25毫升带塞量筒中，合并乙醚提取液。用3毫升4%氯化钠酸性溶液洗涤两次，静止15分钟，用滴管将乙醚层通过无水硫酸钠滤人25毫升容量瓶中。加乙醚至刻度混匀，吸取l0.0毫升乙醚提取液分两次置于10毫升带塞离心管中，在约40 (2的水浴上挥发干，加入0.10毫升乙醇溶解残渣，备用。

　　2、测定

　　(1)聚酰胺粉板的制备：称取1.6克聚酰胺粉，加0.4克可溶性淀粉加约重5毫升，研磨3-5分钟，立即倒入涂布器内制成10 X 8cm、厚度0.3mm的薄层板两块，于室温干燥后保存，于80℃干燥1小时，取出，置于干燥器中保存。

　　(2)点样：在薄层板下端2cm的基线上，用微量注射器点1微升，2微升样品液，同时各点1微升、2微升山梨酸、苯甲酸标准溶液。

　　(3)展开与显色：将点样后的薄层板放人预先盛有展开剂[(1)或(2)]的展开槽内，展开槽周围贴有滤纸，待溶剂前沿上展至lOcm，取出挥干，喷显色剂、斑点成黄色，背景为蓝色。样品中所含有山梨酸、苯甲酸的量与标准斑点比较定量(山梨酸、苯甲酸的比移值依次为0.82，0.73)。

　　A×1000

　　计算： X=( A×1000)/(m×10/25×V2/V1×1000)

　　X：样品中山梨酸(苯甲酸)的含量，g/kg;

　　A：测定用样品液中山梨酸(苯甲酸)的含量，mg;

　　M：样品质量，g;

　　Vl：加入乙醇的体积，ml.，

　　V2：测定时点样的体积，ml; ·

　　10：测定时吸取乙醚提取液的体积，ml;