中药质控新法：RRLC-UV/MS

RRLC-UV/MS中药质控新法

徐智秀 0 2020-05-27

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本文介绍了将高分离度快速液相色谱法紫外-可见检测器和四极杆质谱联用,分析各种中药（TCM）及中药制剂的方法,对不同中药用UV和MS检测所得到的色谱图进行了比较,将UV和MS图谱结合进行目标化合物的鉴定,该方法较传统控制单一组分的方法更为可靠.

本文介绍了将高分离度快速液相色谱法紫外-可见检测器和四极杆质谱联用，分析各种中药（TCM）及中药制剂的方法，对不同中药用UV和MS检测所得到的色谱图进行了比较，将UV和MS图谱结合进行目标化合物的鉴定，该方法较传统控制单一组分的方法更为可靠。

我国拥有长期使用中药和中药制剂的历史，但由于缺乏科学的质量控制标准，中药一直未能得以飞速发展。如今，对中药的质量控制仅局限于外观检查是远远不够的。随着新技术的发展，研究人员发现某些中药中有几百种化合物，其浓度范围很宽，而且由于产地和采摘时期不同，以及炮制和加工工艺不同，中草药的成分也各不相同。因此，对中药化合物的质量控制极具挑战性。由于特殊配方的中药制剂通常是由多种中药组成，因此只测定中药制剂中一两种成分进行质量控制已无法满足要求。例如用于治疗冠心病的中成药芪参益气滴丸，就包含黄芪、丹参、三七和降香4种中药。

本研究以芪参益气滴丸为样品，用高分离度快速液相色谱（RRLC）-紫外-可见检测器和质谱联用，建立中药质量控制的新方法。主要目标是建立一种可靠的方法，能够测定在加热和混合过程中不变的潜在目标化合物。

实验内容

实验仪器

Agilent 1200系列RRLC系统包括：带真空脱气机的SL型二元泵、SL型高性能自动进样器、配置微量流通池（2μl体积，3mm光程）的SL型柱温箱和二极管阵列检测器SL；

Agilent 6410四极杆质谱仪，配置ESI离子源；

Agilent 化学工作站B.02.01SR，用于数据采集和分析；

Agilent ZORBAX XDB C18 RRHT色谱柱，3.0×50mm, 1.8μm粒径。

标准品

丹酚酸B、丹参酮I、丹参酮IIA、隐丹参酮、丹参素、三七皂甙R1和黄芪甲苷均购自中国药品生物制品检定所（NICPBP），人参皂甙Rg1、人参皂甙Rb1、原儿茶醛、原儿茶酸、人参皂甙Re和人参皂甙Rc购自Sigma-Aldrich公司（美国）。

溶剂

乙腈购自Fisher公司（美国），水由Milli-Q纯水系统制备。

样品和样品制备

芪参益气滴丸、黄芪、丹参、三七的中间提取物，及降香精油，由中国TASLY制药公司提供。原药材购自当地中药店。滴丸、中药提取物和中药原料溶于70%甲醇/水溶液中，超声提取30min，用0.22μm滤膜过滤。

RRLC方法

流动相A：0.1%甲酸水；流动相B：乙腈，含0.1%甲酸；

梯度：0min，10%B；8min，38%B；12min，100%B；持续3min，然后10%B；

流速： 1.0ml/min（被动分流器将进入MS的流速降至0.4ml/min）；

柱温：45℃；检测波长：203nm；峰宽：0.5s；狭缝宽度：4nm；光谱：190~400nm，2nm步进。

质谱方法

扫描：80~1400（正/负）；碰撞诱导解离电压：70（正/负）；干燥气体：12L/min；

雾化器压力：50psi；干燥气温度：50℃；毛细管电压：3200V（正/负）。

结果与讨论

用安捷伦方法转换计算器（5989-5130EN）将常规液相色谱方法转换成高分离度快速液相色谱方法。

丹参三七黄芪和降香提取物的比较

由图1可见，在203nm检测波长下丹参和三七的色谱图与混合提取物有很大区别。混合和加热后，某些峰消失了，同时出现了一些新的色谱峰。目标化合物筛选是质量控制的重要步骤，可以确定加工过程中这些化合物是否发生了变化。大多数研究者都用203nm进行检测，因为主要活性化合物是皂甙，在203nm波长下有弱吸收。但203nm处的大峰可能与质量控制无关，那些小峰可能对研究活性成分更重要。因此，需要另一种灵敏度更高的检测器，提供这些成分的更多信息。

不同检测器和条件之间的比较

图2显示了紫外和MS检测的不同结果。在MS的总离子色谱图中有更多的峰，因为某些成分紫外吸收很弱或者没有吸收。用MS检测增加了另一维数据，并得到了这些不同化合物的结构信息。负离子模式给出了这些峰更完整的信息，可以对质量控制的目标化合物进行鉴定。

比较芪参益气滴丸和不同提取物

图3显示了丹参、黄芪和降香提取物与芪参益气滴丸（由这3种提取物和其他填加剂制成）的色谱图。标记数字的峰就是对这一中药制剂质量控制筛选到的目标化合物。根据UV和MS数据，研究不同的色谱峰，以确定这些化合物是否发生了改变，鉴别结果如表1所示。

小结

本文介绍的RRLC紫外和MS检测方法可根据UV和MS检测器提供的信息跟踪中药中几种成分的质量，因此较目前药典控制单一组分的质控法更为可靠。由于中药中的成分可能在炮制和加工过程中发生变化，因此对其的跟踪非常重要。

内容来源：安捷伦科技有限公司

责任编辑：展源

审　　核：何发